一、中药在单层细胞如Ｖｅｒｏ－E6细胞内对病毒抑制作用研究
１．目的 研究中药体外抗病毒的作用。
２． 材料 ①受试药：推荐剂量和使用次数。②对照药：利巴韦林病毒唑注射液，０．１ ｇ／ｍｌ。③细胞：Ｖｅｒｏ－Ｅ6细胞。④病毒株：目的病毒，
３．方法 首先通过中药对细胞的毒性试验，获得中药的半数有毒浓度(TD50) X ｍｇ／ｍｌ和最大无毒浓度(TD0)Xｍｇ／ｍｌ。再通过病毒毒力测定微量法试验，采用ＲＥＥＤ－ＭＵＥＮＣＨ方法计算获得病毒半数感染剂量(TCID50)为X。
中药对病毒的抑制试验细胞病变法
将每毫升３０～４０万个Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞接种到９６孔培养板上，３７℃、５％CO2培养箱中培养１８ 小时，弃掉生长液。将病毒第４代病毒液，用ＤＭＥＭ维持液稀释为１００个TCID50／０．１ ｍｌ，每孔０．１ ｍｌ接种Ｖｅｒｏ－E6细胞，吸附２小时，弃掉病毒液。设立正常细胞对照、病毒对照和利巴韦林阳性药物对照组。将接种后Ｖｅｒｏ－E6细胞置于３７℃、５％Ｃ０２培养箱培养，每天观察记录细胞病变（ＣＰＥ）数，共５天。将该试验重复三次，结果一致。按ＲＥＥＤ－ＭＵＥＮＣＨ方法计算中药对ＳＡＲＳ病毒的半数有效浓度(IC50)和治疗指数ＴＩ。
二、中药对病毒的杀灭效果研究
１．目地 研究中药对病毒（如流感）的杀灭效果。
２．材料 ①受试药：中药１ ｇ生药／ｍｌ。 ②禽流感病毒株：。 ③鸡胚：１０日龄ＳＰＦ鸡胚。
３．方法 将禽流感Ｈ９亚型病毒１０倍系列稀释，接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚０．１ｍｌ／胚，测定病毒的半数感染剂量(EID50)。将受试药从含生药为１ｇ／ｍｌ起进行系列稀释，并分别接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚 ０．１ｍｌ／胚，记录鸡胚死亡情况，以获得受试药对鸡胚的最大无毒剂量。
采用Ｋｌｅｉｎ－Ｄｅｆｏｒｓ悬浮方法，进行受试药对病毒的杀灭率试验。分别取禽流感Ｈ９亚型病毒制成的107.63 EID50／０．１ ｍｌ和108.17 EID50／０．１ ｍｌ悬液，并与系列稀释的中药浸膏按１∶９混合，在２０±１℃条件下作用１０分钟后，再用灭菌生理盐水做１０倍递进稀释。对照组用灭菌生理盐水同法处理。稀释液接种１０日龄ＳＰＦ鸡胚０．１ ｍｌ／胚，置于３７℃温箱培养，记录鸡胚死亡情况。去掉２４小时以内死亡的鸡胚，并及时取出２４小时以后的死胚，至９６小时全部取出，逐个取尿囊液做血凝ＨＡ试验，ＨＡ试验（＋）者判为鸡胚感染。
计算：按照鸡胚感染的结果，以下列方程式计算试验组和对照组鸡胚感染的阳性率、样本含EID50量与病毒杀灭率。
鸡胚感染的阳性率＝ＨＡ（＋）鸡胚数／接种鸡胚数
样本EID50的对数＝Ｌ－ｄＳ－０．５Ｌ为最低稀释倍数的对数；ｄ为稀释度间对数的差；Ｓ为各稀释列阳性率之和
病毒杀灭率＝对照样本EID50－试验样本EID50／对照样本EID50×１００％
三、中药体外抗病毒实验研究
１．目地 研究中药的体外抗病毒作用。
２．材料 ①受试药：１０ ｇ生药／ｇ。②对照药：利巴韦林［病毒唑三氮唑核苷Ｒｉｂａｖｉｒｉｎ原料药］。③病毒株：流感病毒甲３型（ＩＶＡ３）、副流感病毒１型（ＰＩＶ１）、呼吸道合胞病毒ＲＳＶ、腺病毒３型（ＡＤＶ３）、腺病毒７型（ＡＤＶ７）、单纯疱疹病毒１型 （ＨＳＶ－１）、单纯疱疹病毒２型（ＨＳＶ－２）、柯萨奇病毒Ｂ４和６（ＣｏｘＢ４，６），均购自中国预防医学科学院病毒学研究所。④细胞：人喉癌传代细胞Ｈｅｐ－２株，购自卫生部药品生物制品检定所。
３．方法 将中药对Ｈｅｐ－２培养细胞的毒性试验和对病毒致细胞病变作用的影响试验，以及病毒毒力滴定试验结果，通过Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ法计算出中药的５０％毒性浓度（TC50）、５０％有效浓度（EC50）、各病毒的TCID50，并求出ＴＩ（ＴＩ＝TC50／EC50），ＴＩ值越高，表明药效作用越强。
中药对病毒致细胞病变作用的影响研究
取已长成单层细胞的培养板，倒掉培养液，接种１００个TCID50的不同病毒液５０ μｌ于细胞孔，每一种病毒接种一块细胞板，留一行不接种病毒作正常细胞对照。置３７℃ ５％CO2培养箱中吸附１小时，倒掉病毒液，用不含小牛血清的Ｅａｇｌéｓ维持液洗细胞面３次后，加入从最大无毒浓度TC0（１:６４０）起倍比稀释６个浓度的各个药液（包括对照药）１００ ｍｌ／孔，各浓度加３孔。同时设病毒对照、正常细胞对照，补液到２００ｍｌ／孔。置３７℃ ５％CO2培养箱中培养３～４天，每日在倒置显微镜下镜检细胞病变进展。
四、中药对 试验动物的影响
１．目的 观察中药对小鼠流感病毒性肺炎的影响，以评价其抗病毒作用。
２．材料 ①受试药：中药流浸膏１．９ ｇ生药／ｍｌ；②对照药：盐酸吗啉胍。役动物：产地等，雄性，体重。 ３．方法 将雄性小鼠随机分为６组每组１０只：正常对照组，模型对照组，中药小剂量组（１．５ ｇ生药／ ｋｇ，相当于人临床用量的４．５倍）、中剂量组（３．０ ｇ生药／ ｋｇ，相当于人临床用量的９倍）、大剂量组（６．０ ｇ生药／ ｋｇ，相当于人临床用量的１８倍）及阳性药盐酸吗啉胍组（４０ ｍｇ／ｋｇ，相当于人临床用量的９倍）。对用药组小鼠连续灌胃给药５天，每日一次，容量为０．２ ｍｌ／１０ ｇ体重，模型对照组给予等量蒸馏水。第５天给药后３０分钟，在乙醚浅度麻醉下行流感病毒肺适应株ＦＭ１１５ＬＤ５０滴鼻。感染后９６小时解剖小鼠，取肺称重，并计算肺指数。采用Ｓｔｕｄｅｎｔ＇ｓ ｔ ｔｅｓｔ比较各组间差异情况。
五、中药体内抑菌作用研究
１．目地 研究中药的体内抑菌作用。
２．材料 ①受试药：中药浸膏１．９ ｇ生药／ｍｌ②对照药：罗红霉素。③菌种：金黄色葡萄球菌２６１１１（５），由中国药品生物制品检定所提供。④动物：昆明种小鼠（二级），雌雄各半，体重１８～２２ ｇ。
３．方法 将小鼠随机分为５组每组２０只，雌雄各半：空白对照组，中药小剂量组（１．５ ｇ生药／ｋｇ，相当于人临床用量的４．５倍）、中剂量组（３．０ ｇ生药／ｋｇ，相当于人临床用量的９倍）、大剂量组（６．０ ｇ生药／ｋｇ，相当于人临床用量的１８倍）及阳性药罗红霉素组（４０ ｍｇ／ｋｇ，相当于人临床用量的９倍）。给药组连续灌胃给药５天，每日一次，容量为０．２ ｍｌ／１０ ｇ体重，空白对照组给予等量蒸馏水。第５天给药后３０分钟，各组小鼠分别腹腔注射１０－２稀释的新鲜金黄色葡萄球菌悬液０．５ ｍｌ／只，各组继续给药，记录各组小鼠４８小时死亡数。采用ｘ２检验比较各组间差异情况。
合作网站: 中国兽药120信息网
信息均来源网络，如果侵犯请即时联系管理员QQ:330771007
--------------------------------------------------------------------------------
 相关文章
 论中药“康宫散”对母猪生殖系统疾病的意义
中药提取物在养殖业的发展与前景
中药饲料添加剂前景广阔
中药饲料添加剂前景广阔--哈尔滨中科生物工程有限公司
药监局：检验手段不能解决所有中药质量问题
《兽药使用指南（中药卷）》初稿审校会在云南召开
2009年第一次中药审评会在京召开
2009年第一次中药审评会在京召开
|
当前位置: →
京ICP备06046647号